第203章 孙教授：打不过能加入吗？ (第2/3页)

这一步，血清里的游离核酸含量太低，蛋白又多，trizol法很容易带入杂质，a260/280的比值一直上不去。”

    “那你们现在是怎么解决的？”杨煦开始套话。

    江河笑了笑，心中了然，便详细地讲解了一下：

    “双重氯仿抽提，加糖原共沉淀，第一次加氯仿离心后，吸取上清液，移入新的离心管，再加一次等体积的氯仿进行第二次离心，这样可以最大限度去除蛋白污染，浓度不够的问题，就在加异丙醇沉淀前，补5微升5mg/ml的糖原作为共沉淀剂。”

    杨煦连连点头。

    半小时后，两人提着一袋橘子，来到学校实验室。

    听到推门声，众人抬起头。

    “杨主任？”

    “老大？”

    “来来来，大家先停一下手里的活，休息十分钟。”杨煦热情地招呼着，“这是我跟江河特意给你们带的沙糖橘，尝尝，甜得很。”

    众人闻言，纷纷围了过来。

    王晓晴也拿起一个橘子剥开。

    杨煦状似自然的站到王晓晴旁边。

    随口说道：

    “我看你们这进度，是在做rna提取的最终洗涤吧？”

    王晓晴点头：“嗯，江河刚定下的方案，这批是用双重氯仿法跑的，还在等离心结果。”

    “双重氯仿法，是个好思路。”

    杨煦道：“血清样本和组织样本不一样，trizol试剂用在血清上，最大的痛点就是蛋白含量超标，你们在吸取水相上清液的时候，稍有不慎就会把中间的蛋白层带出来，这会导致下游逆转录直接失败。”

    “所以，牺牲第一次的取液量来换取纯度是极其必要的，把第一次吸出的上清液，再加一次等体积的氯仿，剧烈震荡后进行二次离心，这样一来，蛋白杂质基本就被洗干净了。”

    几个学生都纷纷点头。

    杨教授不愧厉害。

    说的跟江河说的一模一样。

    王晓晴也有些意外地看向杨煦：

    “杨主任，你对基础分子实验也这么有研究？”

    杨煦故作谦虚：“医学是不分家的嘛，临床和基础本来就是相辅相成的，再说了，你们这套方案，为了补足二次抽提带来的浓度流失，肯定在沉淀前加了东西吧？”

    王晓晴再度惊讶，乖巧点头：“确实。”

    “5微升，5mg/ml的糖原，糖原作为共沉淀剂，不影响下游的pcr扩增，还能让微量的rna在管底形成肉眼可见的沉淀团块，我说的对吧？”

    “对的对的。”

    王晓晴觉得杨煦有点厉害了，稍有些崇拜。

    杨煦心里乐开了花，脸上云淡风轻。

    他转过头，看了江河一眼，挑了挑眉毛。

    江河默默地剥开一个橘子，把目光偏向窗外，看天。

    ——想装就装吧，谁让你是我老师呢。

    休息时间结束。

    实验重新运转。

    接下来的环节是沉淀后的无水乙醇洗涤。

    王晓晴准备亲自操作移液枪。

    杨煦在她旁边轻声提醒，美其名曰指导：

    “王教授，样本沉淀物很小，洗涤的时候，枪头最好贴着管壁对侧下去。”

    “我知道。”

    “吸的时候慢一点，拇指控制好二挡的回弹力度。”

    “杨主任，你挡着我光了。”

    “哦哦，抱歉，习惯性盯紧细节。”

    就在这时，许久未见的孙长明教授来串门了。

    “哎哟，都在忙呢？”

    他今日看着心情不错，背着手，春风得意的。

    目光扫过全场，看见杨煦也在，笑意更深：“老杨也在啊？怎么，今天医院不忙啊？”

    杨煦脸上的笑容一下就消失了，道：“来看看项目进度，你来干什么？”

    “我？我是来分享学术经验的。”

    孙长明悠然道：“你们还在搞rna提取？设备用得还习惯不？”

    杨煦冷漠：“挺好的，不劳孙教授费心。”

    孙长明嘿嘿一笑：“老杨啊，其实我今天过来是想说，我们研究所那边，消化道肿瘤的rna提取纯化，刚刚取得了重大突破。”

    此话一出，实验室里的众人都抬起了头。

    孙长明：“大家都知道，消化液和血清里的rna极其容易降解，我们团队花了一个月的时间，反复调整试剂配比，终于摸索出了一套极限纯化的办法。”

    王晓晴好奇道：“噢？说来听听。”

    孙长明坐直了身体，开始长篇大论：

    “最重要的就是放弃传统的trizol，我们采用了硅胶膜离心柱法结合多重酶解，首先，在裂解阶段加入高浓度的蛋白酶k，56度水浴消化一个小时，然后，利用离心柱进

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