第134章 黎明前的测序 (第3/4页)

   他将手肘支撑在台面上，按下移液枪的按钮。

    枪尖精准悬停在无色水相的中央，缓缓吸取了400微升的液体，移入一个全新的无酶离心管中。

    全程，江河的手没有一丝颤抖。

    外科医生的定力，在这一刻展现得淋漓尽致。

    陆晓林在旁边看得头皮发麻。

    ——哪怕是浸淫实验室多年的老研究员，悬空吸取水相时也难免会有细微的晃动，但江河的手就像是被焊死了一样，稳得可怕。

    “加入等体积的异丙醇，陈浩，递冰盒。”

    样本在冰上静置了10分钟后，再次放入冷冻离心机。

    12000转，10分钟。

    再次取出时，管底出现了一点点半透明胶状沉淀。

    “rna沉淀出来了。”程溪瑶隔着护目镜，眼睛亮了起来。

    江河：“弃上清，加1毫升75%的冰乙醇洗涤沉淀。”

    轻轻悬浮沉淀后，第三次离心。

    7500转，5分钟。

    最后，用移液枪极其小心地吸走所有的乙醇液体，将离心管敞口放置在超净台的通风处。

    “风干5分钟，不能干透，否则很难溶解。”

    五分钟后，江河加入20微升rnase-free的水，轻轻吹打。

    “去测浓度。”江河把样本递给陆晓林。

    陆晓林拿着样本走到nanodrop分光光度计前，取了一微升滴在检测基座上，放下悬臂。

    电脑屏幕上立刻跳出一条曲线。

    “浓度120 ng/μl，a260/280比值2.02。”陆晓林声音迅速，“师弟，提取极其完美！纯度极高，没有蛋白和苯酚污染！”

    陈浩几个人长长地松了一口气，互相对视了一眼。

    做到了！

    江河毫不犹豫，道：“立刻进行逆转录，rna极易降解，必须马上把它变成稳定的a。”

    “引物用什么？”陆晓林问。

    “用随机六聚体引物（random hexamers）做全转录本的逆转录。”

    江河走到冰箱前，拿出逆转录试剂盒：“不需要特异性引物，我们在pcr阶段再用甲流通用的ha（血凝素）和na（神经氨酸酶）保守区引物去钓出目标片段。”

    看着手里的试剂，江河眼神微动。

    其实，如果这真的是一种完全未知的全新病毒，今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。

    光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。

    但他不一样。

    他记得h1n1的基因图谱，也知道它的外膜蛋白弱点，包括它最容易被哪种引物扩增。

    基本就等同于，拿着标准答案，反向推导解题步骤。

    所以效率才能这么高。

    逆转录反应体系配制完毕。

    放入pcr仪。

    42c孵育60分钟，70c加热5分钟灭活逆转录酶。

    凌晨5:30。

    逆转录完成。

    极其脆弱的rna终于变成了相对稳定的dna。

    “准备pcr扩增反应。”

    “我们要分别扩增它的ha基因、na基因、m基因以及pb1基因片段。”

    pcr反应板在江河等人的熟练操作下加样完毕。

    放入实时荧光定量pcr仪。

    设置热循环程序：95c预变性5分钟，然后进行40个循环的95c变性15秒、60c退火延伸1分钟。

    “大概需要一个半小时。”

    江河脱下最外层的乳胶手套，看了一眼挂钟。

    实验室里的六个学生已经疲惫不堪。

    江河走到走廊上，翻出林振华厅长秘书的电话，拨了过去。

    电话响了七八声才通。

    “王秘书，我是江河，抱歉打扰您休息。”

    “嗯……没关系，怎么了？”

    “王秘书，我需要您立刻向林厅长汇报，附一院收治了一名墨西哥外商，目前已确认为极高危的不明原因重型肺炎，并且，省人民医院和市八医院在昨晚分别收治了与他有明确密切接触和环境接触的两名重症患者，我判断，这是一起典型的具有极强人传人能力的烈性呼吸道传染病。”

    “？？”

    躺床上的王秘书翻身而起，直接被吓出冷汗。

    “你确定？地方疾控有上报吗？”

    “疾控走流程太慢，我目前正在附一院孙长明教授的实验室里跑它的基因测序，现在，我希望省厅立刻动用行政力量，去寻找一辆出租车，司机姓林，三天前搭载过这名墨西哥外商，现在处于失联状态，他极有可能已经发病，如果他在城市里继续活动，后果不堪设想。”

    “江河，你目前有确凿的实验室证据吗？”

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