第228章 100%（六更，求月票！） (第2/3页)

找的，极早期胰腺癌的影子。

    “血清到位了。”

    江河将冻存盒放回干冰中，转身看向身后的团队。

    他的目光从陈浩、易向晚、顾亦舟、陆晓林、蔡卓群、程溪瑶、唐培、王晓晴的脸上一一扫过。

    “各位，这五十份样本，代表着五十个鲜活的生命，也代表着目前全球医学界对胰腺癌早筛的盲区。”

    “我们的任务，是用我们自己搭建的mirna早筛模型，从这五十份看似正常的血清中，把那个已经开始悄悄发生变化的数据，给揪出来。”

    “成功了，这个模型就是目前世界上唯一能提前两到三年预警胰腺癌的雷达。”

    “准备干活。”

    所有人立刻行动起来。

    实验室进入了最高强度的运转状态。

    王晓晴：“水浴锅温度设定37度，准备融化样本。”

    陆晓林拿着移液枪，将融化后的血清样本分装进新的离心管中。

    江河站在操作台前，亲自负责最关键的提取步骤。

    “trizol试剂，准备。”

    蔡卓群立刻递上试剂瓶。

    江河稳稳地吸取定量trizol，加入血清中，反复吹打裂解。

    “室温静置五分钟。”江河看了一眼墙上的挂钟。

    五分钟后。

    “氯仿。”

    加入氯仿，剧烈震荡十五秒，再次静置。

    “上离心机。”

    “4摄氏度，12000g，15分钟。”

    离心机启动。

    这十五分钟里，没有人说话。

    易向晚盯着离心机上的倒计时，咽了一口唾沫。

    程溪瑶和唐培在检查下游的pcr反应液。

    “滴——”

    倒计时结束。

    江河取出离心管。

    液体已经清晰地分成了三层。

    最上层是无色的水相，含有他们需要的rna。

    “开始双重氯仿抽提。”

    这正是他之前解决纯度问题的核心技术。

    小心地吸取上清液，移入新管。

    牺牲了一部分液量以避开中间层的蛋白质污染。

    接着，再次加入等体积的氯仿，震荡，离心。

    第二次离心结束，江河再次吸取上清液。

    “糖原。”

    江河伸出手。

    王晓晴立刻将准备好的糖原递上。

    往水相里滴入5微升浓度为5mg/ml的糖原作为共沉淀剂。

    “异丙醇沉淀，负20度静置二十分钟。”

    二十分钟后，再次离心。

    倒掉上清液，管底出现了一个微小的白色沉淀团块。

    “洗涤。”

    加入75%乙醇，温和洗涤，离心，弃液。

    “风干，加无酶水溶解。”

    整个提取过程耗时将近两个小时。

    第一批五个样本的rna提取完成。

    江河拿着溶解后的样本，走到nanodrop分光光度计前。

    滴入1微升样本，放下检测臂。

    所有人都围了过来。

    屏幕上跳出数据：

    浓度：15ng/μl。

    a260/280：1.95。

    a260/230：2.03。

    极度纯净的数据。

    经历了跨国运输和反复冻融，他们依然靠这套提取工艺拿到了完美的样本。

    “提取成功。”江河淡淡地说了一句，“按这个标准，把剩下的样本全部提出来，王教授，准备逆转录。”

    “收到。”王晓晴立刻接过样本，走向另一边的操作台。

    逆转录过程相对自动化。

    利用特定的茎环引物，将极其微量的mirna逆转录成a。

    时间一分一秒地过去。

    窗外的天色逐渐暗了下来。

    没有人提议吃饭。

    所有人，接力完成每一个步骤。

    晚上八点。

    五十份样本的a全部准备就绪。

    最关键的一步到来了。

    “准备上qpcr机。”江河说。

    易向晚和顾亦舟将配制好的pcr反应体系小心翼翼地加入96孔板中。

    每一个孔里，都包含着引物、荧光染料、a模板和酶。

    这套体系，是他们之前在1万倍稀释的极端低浓度下拉出来的。

    江河拿起96孔板，放入qpcr仪的反应槽中。

    压下盖子。

    输入参数。

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